DNA釋放劑是可以直接用新鮮的動(dòng)物、植物、細(xì)菌樣品制備可以直接進(jìn)行 PCR、LAMP 擴(kuò)增的模板,它具有下列特點(diǎn):
1. 操作簡單,免去 DNA 提取、蛋白去除、RNA 去除等步驟,15 分鐘即得用于 PCR 或 LAMP 擴(kuò)增的 DNA 模板,一個(gè)實(shí)驗(yàn)員每天可以篩選上千個(gè)樣品,尤其適用于大規(guī)模育種篩選和臨床篩選。
2. 兼容性廣,可以用于幾乎所有的分子生物學(xué)樣品,包括細(xì)菌、昆蟲、真菌、各種植物、各種動(dòng)物、法醫(yī)樣品(包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛發(fā)、組織樣品、口腔細(xì)胞和 FTA 卡)、石蠟組織切片等。
3. 成本低廉,在大規(guī)模篩選時(shí)能節(jié)約成本。
4. 環(huán)保健康,不使用任何有毒有害的試劑。
5. 本試劑盒足夠處理 400 份樣品,足夠 400 次 PCR 或 LAMP 擴(kuò)增。本試劑盒不提供擴(kuò)增試劑盒。
常溫運(yùn)輸,溶液 A 成分一和成分二、溶液 B 可以常溫放置。有效期一年。
注意:未列出樣品,用戶需要自己摸索用量。對(duì)富含多醌多酚的植物材料(如棉花), 組織使用量不要超過 0.5mg。
3. 加入 100 uL 溶液 A 工作液,確保固體樣品被溶液淹埋,如果是液體樣品則震蕩 混勻。
4. 95℃保溫 10 分鐘。
5. 待冷卻到常溫后加入 10uL 溶液 B 并混勻得 DNA 釋放液。這些 DNA 釋放液足夠 進(jìn)行 50-100 次 PCR 或 LAMP 擴(kuò)增。 PCR 使用舉例(本產(chǎn)品不包括 PCR 試劑,如果需要購買含 PCR 試劑盒,需另行購買 北京天恩澤編號(hào)為 130985 的免 DNA 提取 PCR 試劑盒)
DNA釋放劑注意:DNA 釋放液體積不要超過 PCR 體積的 1/10。
7. 放入 PCR 儀中進(jìn)行 PCR,PCR 參數(shù)需要根據(jù)引物 Tm 值和靶分子長度等參數(shù)設(shè) 置。一般不低于 35 次循環(huán)。
8. PCR 結(jié)束后取 5-10 uL 直接上樣電泳(本產(chǎn)品不需要上樣液即可直接上樣),紅 色染料電泳速度相當(dāng)于 50 bp DNA 片段。
9. 如果沒有預(yù)期的擴(kuò)增,細(xì)胞裂解液中可能是有 PCR 抑制劑(植物、土壤和血液等 DNA 樣品常含此類抑制物),建議把細(xì)胞裂解液分別稀釋 10 倍和 100 倍再用 3uL 進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增。也可以在 PCR 體系中加入 1/10 的本公司的 PCR 抑制物清除劑。