熒光PCR試劑盒又可以分為探針和熒光染料兩種方法。比較而言,探針雜交技術(shù)在原理上更為嚴(yán)格,所得數(shù)據(jù)更為;熒光染料技術(shù)則成本更為低廉,實驗設(shè)計更為簡便。在選擇實驗方案時要根據(jù)實驗?zāi)康暮蛯?shù)據(jù)精度的要求來決定。
一般說來,應(yīng)選用口碑較好的經(jīng)過大量客戶實驗驗證的熒光PCR試劑盒,因為只有選對了試劑盒才能夠做成漂亮的實驗結(jié)果來,特別是對于一些珍貴的樣品更不能因為節(jié)約一些蠅頭小利而毀了樣品本身。熒光PCR試劑盒在研發(fā)之初就考慮到了一般科研環(huán)境中方方面面的影響,例如我們就光照強度、光照時間對本產(chǎn)品的影響做了嚴(yán)苛的實驗論證,得到1ml本產(chǎn)品盛裝于1.5ml離心管中放置在光照強度下可以保存12h,超過12h產(chǎn)品性能則會下降。
熒光PCR試劑盒這款試劑盒除了價格適中外,還主要有以下優(yōu)點:
1、適用于熒光PCR試劑盒反應(yīng),可以快速、準(zhǔn)確地對目的基因進行定量檢測。
2、在熒光PCR試劑盒中,預(yù)先混有SybrGreen,PCR體系配制時只需入模板、引物、ddH2O即可,操作方便快捷。
3、含有更耐高溫并持續(xù)穩(wěn)定,可以維持更多的循環(huán)數(shù),提供了選擇循環(huán)數(shù)更大的空間。更大的Ct值選擇范圍就意味著可以支持微量目的基因檢測,檢測范圍fM-nM。
4、反應(yīng)的Buffer更適合,使反應(yīng)的基線更水平,無熒光污染信號。使線性期更陡峭,避免了Ct值的無效浮動。使平臺期更平直。也確保了引物與模板能夠更特異地結(jié)合。
5、熒光PCR試劑盒更耐高溫更足量,確保只要擴增反應(yīng)在進行,目的DNA雙鏈在增加,就有線性強度的熒光產(chǎn)生。
6、dNTPs更足量,確保反應(yīng)有更高的平臺期熒光信號。
7、Mg2+濃度更適合,確保線性期有爆發(fā)式的目的DNA片段合成,提高了線性期反應(yīng)體系的擴增系數(shù)和線性期的長度。
8、更高的儀器適配性,熒光PCR試劑盒染料可以被各大主流儀器的激發(fā)光所激發(fā),產(chǎn)生明亮的熒光信號,有利于儀器對信號的捕捉和處理。