ELISA檢測(cè)試劑盒中一般有3次加樣步聚,即加標(biāo)本,加酶結(jié)合物,加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA檢測(cè)試劑盒板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。
ELISA檢測(cè)試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后??乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間,這一保溫過(guò)程稱(chēng)為溫育(incubation),有人稱(chēng)之為孵育,在ELISA檢測(cè)試劑盒中似不恰當(dāng)。
ELISA檢測(cè)試劑盒常壓滅菌操作要點(diǎn):
(1)進(jìn)鍋不擠壓:擺放待滅菌的菌種袋必須分層,每層菌種袋不可擺太擠,要留一定空隙,不能相互擠壓。不適宜將菌種袋臥疊,要分層立放,以保證蒸汽暢流和接種穴完好。為了避免棉塞易潮濕,可在棉塞上蓋一層薄膜或油紙,但覆蓋物不可太大,否則會(huì)影響上下層蒸汽暢流;也可將4個(gè)菌種袋的棉塞并攏,棉塞向下一同塞到4個(gè)菌種袋的空隙中,這樣塑料袋規(guī)格要加長(zhǎng),但防潮效果良好。
(2)及時(shí)滅菌:隨裝隨滅。配料到滅菌間隔時(shí)間越短越好,以免雜菌自繁。大規(guī)模生產(chǎn)時(shí),要分鍋滅菌。
(3)攻頭:指開(kāi)始滅菌時(shí)要大火猛燒。從開(kāi)始滅菌到溫度達(dá)100℃,歷時(shí)越短越好,不能超過(guò)2小時(shí),以免長(zhǎng)時(shí)間高溫高濕造成雜菌自繁。當(dāng)然,ELISA檢測(cè)試劑盒要做到這一點(diǎn)還取決于滅菌鍋的保溫保氣性能。
(4)控中間:指鍋體下部溫度達(dá)到100~C后,控制火勢(shì)燒穩(wěn)火,維持8~10小時(shí)。此間,溫度不可回落,滅菌操作者要堅(jiān)守崗位,不能因通宵滅菌、疲勞或其他原因而懈怠,引起溫度回落。另外,常壓滅菌為了避免燒干應(yīng)注意及時(shí)向蒸發(fā)鍋內(nèi)補(bǔ)充水,但補(bǔ)水不能造成鍋內(nèi)水停止沸騰,可考慮補(bǔ)充沸水或微量連續(xù)補(bǔ)水??梢?jiàn),要想節(jié)省燃料,又要做到上述這些,建造一個(gè)保溫、保汽性能良好的滅菌鍋十分重要。
(5)保尾:指滅菌結(jié)束前要再一次大火猛燒。目的在于加大蒸汽量,滅菌結(jié)束后打開(kāi)柜門(mén)時(shí)有大量蒸汽冒出,帶走棉塞濕氣。但此時(shí)要將連體滅菌鍋中蒸發(fā)鍋內(nèi)的水排干。在開(kāi)門(mén)時(shí)先將門(mén)拉開(kāi)一條縫隙散氣,烘干棉塞,避免冷熱接觸產(chǎn)生冷凝水使棉塞受潮。